どのタンパク質アッセイが最適ですか？
質問者：Arnoldo Ruela |最終更新日：2020年6月14日
カテゴリ：健康的な生活栄養
トップ5タンパク質定量アッセイ
- ビシンコニン酸（BCA）この比色分析、2段階アッセイは、もともと1985年に開発されたもので、64歳のローリーアッセイと比較して赤ちゃんになっています。
- ブラッドフォード。
- フォリン-ローリー。
- ケルダール。
- 紫外線吸収。
BCAアッセイには多くの利点があります。他の方法と比較して、BCAアッセイは最も感度の高いものの1つです（5 ug / mLという低い濃度のタンパク質を検出できます）。他のものよりもばらつきが少なく（ブラッドフォードアッセイなど）、広範囲のタンパク質濃度の測定に使用できます。
上記のほかに、タンパク質アッセイは何に使用されますか？タンパク質アッセイはじめにタンパク質アッセイは、ライフサイエンス研究で最も広く使用されている方法の1つです。タンパク質濃度の推定は、タンパク質精製、電気泳動、細胞生物学、分子生物学、およびその他の研究アプリケーションで必要です。
また、タンパク質の推定に最適な方法はどれですか？
タンパク質濃度のさまざまな推定方法を以下に示します。
- ビウレット法：この方法の感度は非常に低いです。
- UV吸収：この方法の感度は中程度です。
- BCAアッセイ：このメソッドは高感度で、1 µgの低濃度のタンパク質を検出します。
ブラッドフォードアッセイはどのくらい正確ですか？
ブラッドフォードアッセイは、通常0 µg / mLから2000µg / mLの短い範囲で直線的であり、分析前にサンプルの希釈が必要になることがよくあります。これらの希釈を行う際に、1つの希釈の誤差がさらに希釈されると、線形関係が生じるため、常に正確であるとは限りません。
39関連する質問の回答が見つかりました
なぜタンパク質推定を行うのですか？
タンパク質の定量化は、サンプルまたは製剤化された製品の総タンパク質含有量を理解するために必要です。他の重要なアッセイの範囲では、データを生成するために正確な総タンパク質含有量の結果が必要になるため、正確なタンパク質の定量化は重要です。
なぜBSAがタンパク質推定に使用されるのですか？
BSAは、アッセイでシグナルを増加させる安定性、多くの生化学反応での効果の欠如、および牛産業の副産物であるウシ血液から大量に容易に精製できるため低コストであるために使用されます。
タンパク質推定の他の方法は何ですか？
プロセスを簡素化するために、タンパク質を定量化するためのいくつかの信頼できる方法が開発されました。これらの方法には、Warburg-Christian、Lowry Assay 、およびBradford Assayが含まれます（これらはすべて高分子の吸光度特性に依存しています）。ブラッドフォードアッセイ法は、色素を使用してタンパク質に結合します。
タンパク質はどのように測定されますか？
溶液中のタンパク質濃度を測定するための最も簡単で直接的なアッセイ方法は、280 nm（UV範囲）での吸光度を測定することです。芳香族側鎖を含むアミノ酸（すなわち、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニン）は強い紫外線吸収を示します。
ブラッドフォードアッセイで595nmが使用されるのはなぜですか？
疎水性およびイオン性相互作用によって一緒に保持される染料の陰イオン結合形態は、歴史的に最大で595nmに保持される吸収スペクトルを有する。 595 nmでの吸光度の増加は、結合した色素の量に比例し、したがってサンプルに存在するタンパク質の量（濃度）に比例します。
ブラッドフォードアッセイが検出できる最小および最大のタンパク質濃度はどれくらいですか？
マイクロプレートブラッドフォードアッセイ
メーカーによると、このアッセイは280nmでの吸光度よりも10倍感度が高いとのことです。我々は確実に検出可能な最小値であることが0.1の吸光度を取る場合、A 280は、約75マイクログラム/ミリリットルの最小値を検出することができます。 BCAタンパク質アッセイとは何ですか？
BCAタンパク質アッセイは、サンプル中の総タンパク質の定量に使用されます。この方法の原理は、タンパク質は、アルカリ性溶液（ビウレット反応）中のCu + 1へのCu + 2を削減し、ビシンコニン酸による紫色の形成をもたらすことができることです。
タンパク質が280nmで測定されるのはなぜですか？
原理。溶液中のタンパク質は、 280および200nmで最大の吸光度を持つ紫外線を吸収します。芳香環を有するアミノ酸は、280nmでの吸光度ピークの主な理由です。ペプチド結合は、主に200nmのピークの原因です。
サンプル中のタンパク質の量を定量化する4つの方法は何ですか？
タンパク質測定の実用的な側面：
- 精製中のタンパク質の回復を監視します。
- サンプル中のタンパク質の総量を測定します。
- 比色分析。ビウレットアッセイ、ローリーアッセイ、ビスシンコニン酸（BCA）アッセイ、ブラッドフォードアッセイ。
- アミノ酸分析。
- ラジオラベリングおよび他のタグとのラベリング。
タンパク質標準とは何ですか？
タンパク質標準は、SDSページで使用する場合、分子量組成がわかっているタンパク質の集まりであり、特定のタンパク質の分子量（kD）を推定するための参照として使用します。 tldr：タンパク質標準は、参照として使用する既知のMWタンパク質です。
分光光度法で使用される標準曲線は何ですか？
検量線とも呼ばれる検量線は、定量的調査手法として使用されるグラフの一種です。既知のプロパティを持つ複数のサンプルが測定およびグラフ化されます。これにより、グラフの補間によって未知のサンプルに対して同じプロパティを決定できます。
ローリー法はどのように機能しますか？
ローリータンパク質アッセイでは、アルカリ性条件下でタンパク質のペプチド結合と結合する銅を使用します。これにより一価の銅イオンが形成され、フォリン試薬と反応して青色の物質に還元されます。したがって、タンパク質の濃度を決定することができます。
タンパク質濃度をどのように計算しますか？
溶液中のタンパク質の濃度は、分子量、吸光係数、およびλmaxをランベルトベールの法則の導出形式に代入することによって決定できます。物質のλmaxは、物質が最も強い吸光度を経験する波長です。 Proteinの場合、この波長は280nmです。
ミルク中のタンパク質をどのように計算しますか？
ミルク中のタンパク質含有率を決定するための標準的な方法は、事実上、全窒素を分析するケルダール法です。アミノ酸に由来するタンパク質窒素は、ミルク中の窒素の約95％に相当します。尿素などの非タンパク質窒素は、約5％の少量で存在します。
たんぱく質はどうですか？
タンパク質は、アミノ酸と呼ばれる数百または数千の小さな単位で構成されており、長鎖で互いに結合しています。たんぱく質を作るために組み合わせることができる20種類のアミノ酸があります。これらのタンパク質は、細胞内および体全体に原子や小分子を結合して運びます。
タンパク質濃度を決定する際に検量線を使用する目的は何ですか？
標準曲線は、2つの量の関係を表しています。これらは、より簡単に測定できる量（NADHレベル）から未知の量（グルコース濃度）の値を決定するために使用されます。タンパク質濃度測定の標準曲線の例を図5-1に示します。
ビウレットテストは何を測定しますか？
また、Piotrowskiのテストとして知られているビウレット試験は、ペプチド結合の存在を検出するために使用される化学的試験です。ビウレット反応は、ペプチド結合がペプチド内のアミノ酸ごとに同じ頻度で発生するため、タンパク質の濃度を評価するために使用できます。