Bガラクトシダーゼアッセイとは何ですか？
質問者：Iskander Dumiche |最終更新日：2020年2月24日
カテゴリ：医療健康消化器疾患
β-ガラクトシダーゼアッセイ（CPRG） β-ガラクトシダーゼアッセイ（CPRG）は、 β-ガラクトシダーゼ発現コンストラクトでトランスフェクトされた細胞のライセート中のβ-ガラクトシダーゼ活性を測定するための簡単、迅速、高感度の方法を提供します。 β-ガラクトシダーゼアッセイ（CPRG）アッセイは、クロロフェノールレッド-＆ベータを使用します。
これに関して、Bガラクトシダーゼの機能は何ですか？β -ガラクトシダーゼ、とも呼ばれるラクターゼ、β-GALまたはβ-Galは、グリコシド加水分解酵素グリコシド結合の切断を介して単糖にβ-galactosidesの加水分解を触媒するものです。 β-ガラクトシドには、グリコシド結合がガラクトース分子の上にあるガラクトースを含む炭水化物が含まれます。
第二に、ベータガラクトシダーゼはどこにありますか？リソソーム
この点で、ベータガラクトシダーゼ活性はどのように測定されますか？
β-ガラクトシダーゼ活性を測定するために、黄色の蓄積（420 nmの吸光度を増加させる）/分をモニターします。リン酸緩衝液、100 mLあたり：
- 1.61グラムのNa 2 HPO 4。
- 0.55グラムのNaH 2 PO 4。
- pHを7.0に調整します。
- リン酸緩衝液は室温で安定しており、毎回新鮮にする必要はありません。
ベータガラクトシダーゼはどのように乳糖を分解しますか？
β-ガラクトシダーゼには3つの酵素活性があります（図1）。まず、二糖ラクトースを切断してグルコースとガラクトースを形成し、解糖系に入ることができます。第二に、酵素はラクトースからアロラクトースへのトランスガラクトシル化を触媒することができ、第三に、アロラクトースは単糖に切断することができます。
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酵素とはどういう意味ですか？
酵素：生体内の化学反応の速度を速めるタンパク質。酵素は特定の化学反応の触媒として機能し、特定の反応物のセット（基質と呼ばれる）を特定の生成物に変換します。酵素がなければ、私たちが知っているような生命は存在しなかったでしょう。
酵素はタンパク質ですか？
酵素は、触媒として機能し、生命のあらゆる場所で複雑な反応が起こるのを助ける生物学的分子（タンパク質）です。あなたが肉を食べたとしましょう。プロテアーゼは働き始め、アミノ酸間のペプチド結合を破壊するのを助けます。
lacZの機能は何ですか？
lacZ遺伝子は、β-ガラクトシダーゼと呼ばれる酵素をコードします。これは、ラクトース（二糖）を容易に使用できるグルコースとガラクトース（単糖）に分解する役割を果たします。 lacY遺伝子は、ラクトースパーミアーゼと呼ばれる膜タンパク質をコードします。これは、細胞がラクトースを取り込むことを可能にする膜貫通型「ポンプ」です。
グルコースはBガラクトシダーゼを阻害しますか？
グルコースはB-ガラクトシダーゼの合成を阻害します。ブドウ糖のこの抑制効果（カタボライト抑制として知られている）は、サイクリックAMPのレベルを低下させます。サイクリックAMPは、lacオペロンの活性化因子であるCAP（カタボライト活性化タンパク質）およびCRPに結合します。
lacZは何に使用されますか？
lacZは、二糖ラクトースをグルコースとガラクトースに切断する細胞内酵素であるβ-ガラクトシダーゼ（ LacZ ）をコードします。 lacYは、ベータガラクトシドパーミアーゼ（LacY）をエンコードします。これは、同じ方向のプロトン勾配を使用して、ラクトースを含むβ-ガラクトシドを細胞に送り込む膜貫通型シンポーターです。
OnpgがBガラクトシダーゼの基質として使用されるのはなぜですか？
オルト-ニトロフェニル-β-ガラクトシド（ ONPG ）は、 β-ガラクトシダーゼ活性を検出するための比色および分光光度法の基質です。ラクトースの利用にはβ-ガラクトシダーゼが必要であるため、生成された色の強度を酵素速度の尺度として使用できます。
βガラクトシダーゼの発現に対するIPTGの効果は何でしたか？
IPTG （イソプロピルベータ-D-チオガラクトシド）ベータ-ガラクトシダーゼ発現の誘導物質は、ラクトース代謝物の分子模倣物として機能します。 IPTGの存在は、lacリプレッサーに結合するため、下流の遺伝子転写のためにlacオペロンの活性化を引き起こします。
アルファガラクトシダーゼ酵素とは何ですか？
アルファ-ガラクトシダーゼは、ラフィノース、スタキオース、および/またはバーバスコースの糖を含むさまざまな穀物、穀物、ナッツ、野菜に起因する鼓腸および膨満の予防に使用される酵素です。
ベータガラクトシダーゼラボで2つの波長の吸光度を測定する必要があったのはなぜですか？
ベータガラクトシダーゼラボで2つの波長の吸光度を測定する必要があったのはなぜですか？ 600 nmでの吸光度を420 nmでの吸光度を製造のo-ニトロフェノールの量に比例している間、私たちの酵素活性計算を標準化するのに役立つ細胞密度に比例します。
大腸菌はどのようにBガラクトシダーゼ酵素を使用しますか？
Eで。コリ、この酵素は、12炭素糖ラクトースを2つの6炭素糖、グルコースとガラクトースに分解する際の重要な触媒です。ラクトースを増殖培地に加えると、細菌内にβ-ガラクトシダーゼが徐々に蓄積します。
Onpgを溶解するにはどうすればよいですか？
ONPGを37℃の蒸留水に溶解します。 1.0 MのNaH 2 PO 4溶液を追加します。溶液は無色でなければなりません。冷蔵庫（約4℃）で保存してください。
アロラクトースはどのように形成されますか？
存在する場合、インデューサーであるアロラクトースはリプレッサーサブユニットに結合し、それらが活性な四量体に集合するのを防ぎます。アロラクトースは、β-ガラクトシダーゼによってラクトースから安定した低速度で生成されるため、ラクトースシグナルとして機能します。
乳糖はガラクトシドですか？
ガラクトシド。ガラクトシドは、ガラクトースを含む配糖体です。生化学で最も一般的に認識され、使用されているβ-ガラクトシドはラクトースです。ただし、ONPGなどの他の化学物質は知られていますが、これらは通常、生化学的アッセイ用に合成されます。
ONPを測定するためにどの波長を選択できますか？
420 nm
ベータガラクトシダーゼの分子量はどれくらいですか？
520,000ダルトン
ONPが黄色なのはなぜですか？
ページ10：ONPGを使用したβ-ガラクトシダーゼ活性のアニメーション表示ラクトースとONPGの違い（アッセイの目的で）は、グルコースとは異なり、生成物ONPは切断後に測定できることです。黄色になります（図。色は、分子が特定の波長の光を吸収することを意味します。
ONPはどの色の光を吸収しますか？
一方、ONPは黄色の物質であり、紫色の光を吸収することを意味します。