ブラッドフォードアッセイはどのように機能しますか?
質問者:KatherinaMascuñana|最終更新日:2020年5月4日
カテゴリ:健康的な生活栄養
ブラッドフォードアッセイ、比色タンパク質アッセイは、色素クーマシーブリリアントブルーG-250の吸光度変化に基づくものです。酸性条件下では、色素の赤色が青色に変換され、アッセイ対象のタンパク質に結合します。結合するタンパク質がない場合、溶液は茶色のままになります。
その上、ブラッドフォードアッセイはどのようにタンパク質濃度を決定しますか?ブラッドフォードタンパク質アッセイは、サンプル中の総タンパク質の濃度を測定するために使用されます。このアッセイの原理は、酸性条件下でタンパク質分子がクーマシー色素に結合すると、茶色から青色に色が変化することです。
上記のほかに、ブラッドフォード試薬はどのように機能しますか?ブラッドフォード試薬は、溶液中のタンパク質の濃度を測定するために使用できます。手順は、染料、ブリリアントブルーG、および溶液中のタンパク質間の複合体の形成に基づいています。タンパク質-色素複合体は、色素の最大吸収を465nmから595nmにシフトさせます。
これに加えて、ローリー法はどのように機能しますか?
ローリータンパク質アッセイでは、アルカリ性条件下でタンパク質のペプチド結合と結合する銅を使用します。これにより一価の銅イオンが形成され、フォリン試薬と反応して青色の物質に還元されます。したがって、タンパク質の濃度を決定することができます。
ブラッドフォードアッセイはどのくらい正確ですか?
ブラッドフォードアッセイは、通常0 µg / mLから2000µg / mLの短い範囲で直線的であり、分析前にサンプルの希釈が必要になることがよくあります。これらの希釈を行う際に、1つの希釈の誤差がさらに希釈されると、線形関係が生じるため、常に正確であるとは限りません。
39関連する質問の回答が見つかりました
ブラッドフォードアッセイは定性的ですか、それとも定量的ですか?
ブラッドフォードタンパク質アッセイは、1976年にマリオンM.ブラッドフォードによって開発されました。これは、溶液中のタンパク質の濃度を測定するために使用される、迅速で正確な分光分析手順です。反応は、測定されたタンパク質のアミノ酸組成に依存します。
ブラッドフォードアッセイを使用した場合の2つの潜在的な問題は何ですか?
-ブラッドフォードアッセイを持つ2つの潜在的な問題は、アッセイがより大きなタンパク質にのみ有効であり、サンプルは狭い温度およびpH範囲内でなければならないことことです。 3000〜5000ダルトン未満のタンパク質を含むサンプルは、吸光度が低すぎるため、読み取るのが困難になります。
ブラッドフォード試薬が青色に変わるのはなぜですか?
タンパク質のブラッドフォードアッセイは、その感度、速度、利便性、UV対応分光光度計の必要性の欠如、および96ウェルプレートへの適応性のために広く使用されています。 「ブラッドフォード試薬」は、タンパク質と相互作用すると青色に変わる酸性の染色剤です。
なぜBSAを標準として使用するのですか?
BSAは、アッセイでシグナルを増加させる安定性、多くの生化学反応での効果の欠如、および牛産業の副産物であるウシ血液から大量に容易に精製できるため低コストであるために使用されます。
BSAは何に使用されますか?
ウシ血清アルブミン( BSA )は、タンパク質濃度標準としての機能、細胞栄養素としての機能、制限消化中に酵素を安定化する能力など、さまざまな実験室アプリケーションで使用されます。
ブラッドフォードアッセイではどの色素が使用されますか?
染料クマシーブリリアントブルーG-250
クマシーブルーは何に結合しますか?
クマシーブルーによるタンパク質ゲルの染色。クマシー色素(R-250およびG-250)は、色素スルホン酸基と正のタンパク質アミン基の間のイオン相互作用、およびファンデルワールス引力を介してタンパク質に結合します。クマシーG-250は、pH2未満でロイコ型を示します。
標準曲線の目的は何ですか?
標準曲線は、2つの量の関係を表しています。これらは、より簡単に測定できる量から未知の量の値を決定するために使用されます。また、検量線を使用して、DNAフラグメントの塩基対の数を決定します。
ビウレットテストの原理は何ですか?
ビウレットテストは、アルカリ性条件下でペプチド結合(-CONH-基)と紫色のキレート錯体を形成するCu(II)イオンの能力に基づいています。ペプチド結合の4つの窒素原子からの孤立した電子対は、銅(II)イオンを配位してキレート錯体を形成します。
ジペプチドはビウレットテストで陽性になりますか?
タンパク質のもう1つの非常に一般的なテストは、ビウレット反応です。これはペプチド結合のテストであり、2つ以上のペプチド結合が存在する場合に陽性です。したがって、ジペプチドはビウレット試薬と反応しません。
ビウレットは何と反応しますか?
注:ビウレット反応は通常、テストサンプル中のタンパク質の存在と濃度を示すために使用され、タンパク質のペプチド結合が銅イオンと反応して紫色または紫色の複合体を生成するときに発生します。溶液中の色の強度は、ペプチド結合の数に比例します。
なぜタンパク質推定を行うのですか?
タンパク質の定量化は、サンプルまたは製剤化された製品の総タンパク質含有量を理解するために必要です。他の重要なアッセイの範囲では、データを生成するために正確な総タンパク質含有量の結果が必要になるため、正確なタンパク質の定量化は重要です。
タンパク質アッセイの目的は何ですか?
タンパク質アッセイの目的
タンパク質アッセイの目的は、サンプルの特定のタンパク質またはさまざまなタンパク質の配列の量または濃度を決定することです。 ローリー法の原理は何ですか?
タンパク質濃度を決定するローリー法の背後にある原理は、アルカリ性条件下でのペプチド窒素と銅[II]イオンとの反応性と、それに続く銅によるフォリン-チオカルテアリンモリブデン酸リンタングステン酸のヘテロ高分子モリブデン酸への還元にあります。
タンパク質をどのように定量化しますか?
プロセスを簡素化するために、タンパク質を定量化するためのいくつかの信頼できる方法が開発されました。これらの方法には、Warburg-Christian、Lowryアッセイ、およびBradfordアッセイが含まれます(これらはすべて高分子の吸光度特性に依存します)。ブラッドフォードアッセイ法は、色素を使用してタンパク質に結合します。
ビウレットテストは何を測定しますか?
また、Piotrowskiのテストとして知られているビウレット試験は、ペプチド結合の存在を検出するために使用される化学的試験です。ビウレット反応は、ペプチド結合がペプチド内のアミノ酸ごとに同じ頻度で発生するため、タンパク質の濃度を評価するために使用できます。
ローリー法がより敏感なのはなぜですか?
Folin-Ciocalteu試薬を使用して還元銅を検出することにより、 Lowryアッセイはビウレット反応のみの場合よりもほぼ100倍感度が高くなります。しかし、このアッセイにはエラーがないわけではなく、他の多くの化合物(基本条件および界面活性剤-SDS)による干渉に敏感です。