ChIPチップアッセイとは何ですか?

質問者:Hedda Noutel |最終更新日:2020年6月18日
カテゴリ:科学遺伝学
4.4 / 5 (211ビュー。38票)
クロマチン免疫沈降ChIPアッセイは、細胞の自然なクロマチンコンテキスト内でのタンパク質-DNA相互作用を調べるために使用される強力で用途の広い手法です(1,2)。さらに、 ChIPアッセイは、特定のタンパク質-DNA相互作用の空間的および時間的関係を定義するために使用できます。

これに加えて、ChIP分析とは何ですか?

、チップ-seqとして知ら-sequencingチップは、DNAとタンパク質の相互作用を分析するために使用される方法です。 ChIP -seqは、クロマチン免疫沈降( ChIP )と超並列DNAシーケンスを組み合わせて、DNA関連タンパク質の結合部位を特定します。

また、ChIP seqはinvivoですか? ChIP -超高スループット大規模並列シーケンシングとクロマチン免疫沈降(チップ組み合わせ配列は、ますますゲノム規模でのインビボマッピングタンパク質-DNA相互作用のために使用されています。通常、 ChIP - Seqからの短いシーケンス読み取りは、さらなる分析のためにリファレンスゲノムにマッピングされます。

したがって、ChIPデータとは何ですか?

クロマチン免疫沈降( ChIP )により、DNA上のタンパク質結合部位を決定することができます。クロマチンは、ヒストンタンパク質とともにヌクレオソームにパッケージ化されたDNAの複合体です。 ChIPは、細胞または組織のホルムアルデヒド固定によってDNAと関連タンパク質の間に作られた可逆的なクロスリンクを利用します。

ChIP seqデータをどのように分析しますか?

ChIP-seqデータの分析

  1. 前処理シーケンス読み取り。
  2. マップが読み取ります。
  3. マップされたデータを後処理します。
  4. ChIP信号の品質と強度を評価します。
  5. ゲノムブラウザでカバレッジプロットを表示します。
  6. MACS2でChIPピークを呼び出します。
  7. 取得した呼び出しを検査します。
  8. 呼び出されたピーク内の配列モチーフを探します。

21関連する質問の回答が見つかりました

ChIPは何に使用されますか?

クロマチン免疫沈降( ChIP )は、細胞内のタンパク質とDNA間の相互作用調査するために使用される免疫沈降実験手法の一種です。

ChIPアッセイとは何ですか?

クロマチン免疫沈降ChIPアッセイは、細胞の自然なクロマチンコンテキスト内でのタンパク質-DNA相互作用を調べるために使用される強力で用途の広い手法です(1,2)。次に、細胞を溶解し、超音波処理または酵素消化のいずれかを使用してクロマチンを回収および断片化します。

ChIP seqの費用はいくらですか?

ChIP - seqはどれくらい高価ですか?典型的なChIPキットは最大500ドルかかる可能性がありますが、次世代プラットフォームでのシーケンスは、レーンあたり最大500ドルから1000ドルかかります(非営利の大学の堕落または営利企業にアウトソーシングするかどうかによって異なります)。

倍濃縮ChIPはどのように計算されますか?

フォールドエンリッチメントの計算方法。目的の抗体と陰性抗体のCt値の差のデルタCtを計算します。これを行うには、目的の抗体から陰性抗体のCtを差し引きます。すべてのサンプルに対してこれを行います。

ChIP qPCRとは何ですか?

ChIP - qPCR 。定量PCRと組み合わせたクロマチン免疫沈降( ChIP )を使用して、既知のゲノム結合部位でのタンパク質-DNA相互作用を調べることができます。クロマチン調製:ヒストンや転写因子などのクロマチン結合タンパク質のDNAへの細胞固定(架橋)とそれに続く細胞溶解。

ChIPには何が入力されていますか?

ただし、すべての実験にはコントロールサンプルが必要です。 ChIP実験には、入力DNAおよび/またはモックIPの2つの制御オプションのいずれかがあります。入力DNAは、本質的に細胞溶解と超音波処理によって精製されたDNAです。細胞溶解と超音波処理の効率をテストするためにゲル上で実行されるのと同じDNAです。

免疫沈降アッセイとは何ですか?

免疫沈降IP )は、特定のタンパク質に特異的に結合する抗体を使用して、溶液からタンパク質抗原を沈殿させる技術です。このプロセスは、何千もの異なるタンパク質を含むサンプルから特定のタンパク質を分離および濃縮するために使用できます。

タンパク質結合を測定するためのChIPシーケンシングの最初のステップは何ですか?

ChIP - Seqは通常、 DNA-タンパク質複合体の架橋から始まります。次に、サンプルを断片化し、エキソヌクレアーゼで処理して、結合していないオリゴヌクレオチドをトリミングします。タンパク質特異的抗体は、 DNA-タンパク質複合体を免疫沈降させるために使用されます。

DNAはどのように配列決定されますか?

DNA配列決定は、DNA分子を取り、ヌクレオチド(塩基)のその特定配列を決定することを含みます。ゲノムまたはexomesの配列決定は、個々の染色体の塩基配列を含みません。代わりに、 DNAは通常、ランダムに断片化されて多数の小さな断片になり、それぞれが個別にシーケンスされます。

Mnase seqとは何ですか?

DNAがミクロコッカスヌクレアーゼ消化とそれに続くハイスループットシーケンシングに由来する入力分子であるアッセイ。ヌクレオソームがミクロコッカスヌクレアーゼによる消化から関連するDNAを保護する能力に基づいてヌクレオソームの位置を区別する方法。

ChIP seqをどのように実行しますか?

ChIP - seq実行するために、クロマチンは細胞または組織から分離され、断片化されます。クロマチン関連タンパク質に対する抗体は、特定のクロマチンフラグメントを濃縮するために使用されます。 DNAを回収し、配列を決定し、リファレンスゲノムにアラインメントして、特定のタンパク質結合遺伝子座を決定します。

ATAC seqはどのように機能しますか?

説明。 ATAC - seqは、ゲノムのオープン領域にシーケンシングアダプターを挿入する高活性変異体Tn5トランスポザーゼでオープンクロマチンをプローブすることにより、アクセス可能なDNA領域を識別します。次に、タグ付けされたDNAフラグメント精製し、PCR増幅し、次世代シーケンシングを使用してシーケンシングします。

次世代シーケンスとは何ですか?

次世代シーケンシング(NGS)、超並列またはディープシーケンシングは、ゲノム研究に革命をもたらしたDNAシーケンシングテクノロジーを表す関連用語です。 NGSを使用すると、ヒトゲノム全体を1日以内にシーケンスできます。

RNA Seq分析とは何ですか?

RNA - SeqはRNAシーケンシングとも呼ばれ、次世代シーケンシング(NGS)を使用して、特定の瞬間の生体サンプル中のRNAの存在と量を明らかにし、継続的に変化する細胞トランスクリプトームを分析する、特定のテクノロジーベースのシーケンシング技術です。

クロマチン免疫沈降はどのように機能しますか?

クロマチン免疫沈降ChIP )は、特定のタンパク質がin vivoで特定のDNA配列に結合するか、または局在するかどうかを判断するために使用される手順を指します。 DNAを結合したタンパク質と一緒に小さな断片に剪断します。 DNA結合タンパク質に特異的な抗体を結合させ、沈殿によって複合体を単離します。

RNAシーケンシングは何に使用されますか?

RNA - seqRNA-シーケンシング)は、次世代シーケンシング(NGS)を使用してサンプル中のRNAの量と配列を調べることができる技術です。 RNA内にコードされている遺伝子発現パターンのトランスクリプトームを分析します。