タンパク質の推定に最適な方法はどれですか?

質問者:ダミアナ・フガエフ|最終更新日:2020年6月14日
カテゴリ:健康的な生活栄養
4/5 (106ビュー。15投票)
タンパク質濃度のさまざまな推定方法を以下に示します。
  • ビウレット:この方法の感度は非常に低いです。
  • UV吸収:この方法の感度は中程度です。
  • BCAアッセイ:このメソッドは高感度で、1 µgの低濃度のタンパク質を検出します。

したがって、タンパク質推定の他の方法は何ですか?

プロセスを簡素化するために、タンパク質を定量化するためのいくつかの信頼できる方法が開発されました。これらの方法には、Warburg-Christian、Lowry Assay 、およびBradford Assayが含まれます(これらはすべて高分子の吸光度特性に依存しています)。ブラッドフォードアッセイ法は、色素を使用してタンパク質に結合します。

さらに、ローリー法はどのようにタンパク質を推定しますか?タンパク質濃度を決定するローリー法の背後にある原理は、アルカリ性条件下でのペプチド窒素と銅[II]イオンとの反応性と、それに続く銅によるフォリン-チオカルテアリンモリブデン酸リンタングステン酸のヘテロ高分子モリブデン酸への還元にあります。

これに関して、なぜBSAがタンパク質推定の標準として使用されているのですか?

BSAは、アッセイでシグナルを増加させる安定性、多くの生化学反応での効果の欠如、および牛産業の副産物であるウシ血液から大量に容易に精製できるため低コストであるために使用されます。

タンパク質をどのように分析しますか?

溶液中のタンパク質濃度を測定するための最も簡単で直接的なアッセイ方法は、280 nm(UV範囲)での吸光度を測定することです。芳香族側鎖を含むアミノ酸(すなわち、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニン)は強い紫外線吸収を示します。

37関連する質問の回答が見つかりました

タンパク質の存在をどのように検出できますか?

食品テスト2:タンパク質-ビウレット溶液
ビウレット溶液は、タンパク質の存在識別するために使用されます。ビウレット試薬は青色の溶液で、タンパク質と反応するとピンクパープルに変色します。

なぜタンパク質推定を行うのですか?

タンパク質の定量化は、サンプルまたは製剤化された製品の総タンパク質含有量を理解するために必要です。他の重要なアッセイの範囲では、データを生成するために正確な総タンパク質含有量の結果が必要になるため、正確なタンパク質の定量化は重要です。

タンパク質の測定単位は何ですか?

タンパク質(通常は酵素)の単位(U)または国際単位(IU)は、通常、定義されたアッセイ条件下( pH、温度、基質濃度など)。

サンプル中のタンパク質の量を定量化する4つの方法は何ですか?

タンパク質測定の実用的な側面:
  1. 精製中のタンパク質の回復を監視します。
  2. サンプル中のタンパク質の総量を測定します。
  3. 比色分析。ビウレットアッセイ、ローリーアッセイ、ビスシンコニン酸(BCA)アッセイ、ブラッドフォードアッセイ。
  4. アミノ酸分析。
  5. ラジオラベリングおよび他のタグとのラベリング。

ローリー法はどのように機能しますか?

ローリータンパク質アッセイでは、アルカリ性条件下でタンパク質のペプチド結合と結合する銅を使用します。これにより一価の銅イオンが形成され、フォリン試薬と反応して青色の物質に還元されます。したがって、タンパク質の濃度を決定することができます。

タンパク質をどのように精製しますか?

4.1.3。タンパク質は、溶解性、サイズ、電荷、および結合親和性に応じて精製できます
  1. 透析。
  2. ゲルろ過クロマトグラフィー。
  3. イオン交換クロマトグラフィー。
  4. アフィニティークロマトグラフィー。
  5. 高圧液体クロマトグラフィー。

タンパク質推定のローリー法とは何ですか?

ローリータンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質の総レベルを測定するための生化学的アッセイです。総タンパク質濃度は、タンパク質濃度に比例したサンプル溶液の色の変化によって示されます。これは、比色を使用して測定できます。

BSAはタンパク質ですか?

ウシ血清アルブミンBSAまたは「フラクションV」)は、牛に由来する血清アルブミンタンパク質です。実験室でのタンパク質濃度標準としてよく使用されます。

BSAは何に使用されますか?

ウシ血清アルブミンBSA )は、タンパク質濃度標準としての機能、細胞栄養素としての機能、制限消化中に酵素を安定化する能力など、さまざまな実験室アプリケーションで使用されます。

BSA標準とは何ですか?

BSA標準は、総タンパク質アッセイで正確な標準曲線とキャリブレーションコントロールを生成するための高品質のリファレンスサンプルです。ウシ血清アルブミンBSA )溶液は、BCA、ブラッドフォード、およびその他のタンパク質アッセイプロトコルで使用するためのタンパク質濃度参照標準です。

どのタンパク質アッセイが最適ですか?

トップ5タンパク質定量アッセイ
  • ビシンコニン酸(BCA)この比色分析、2段階アッセイは、もともと1985年に開発されたもので、64歳のローリーアッセイと比較して赤ちゃんになっています。
  • ブラッドフォード。
  • フォリン-ローリー。
  • ケルダール。
  • 紫外線吸収。

アルブミンは何を測定しますか?

アルブミン血液検査は、血液中のアルブミンの量を測定します。アルブミンは肝臓で作られるタンパク質です。アルブミンは、他の組織に漏れないように血流に水分を保つのに役立ちます。低アルブミンレベルは、肝臓や腎臓に問題があることを示している可能性があります。

BSAはバッファーですか?

説明:アセチル化されていないBSAは、酵素反応の担体タンパク質または安定剤として使用されます。ニックトランスレーション、ポリメラーゼ反応、およびライゲーション用のバッファーで推奨されますBSAは、他のタンパク質の量を決定するための標準タンパク質として使用されます(ブラッドフォードアッセイ)。

タンパク質濃度を決定することが重要なのはなぜですか?

生体分子間の相互作用を分析することは、それらの機能を理解するために重要です。 2つの相互作用するタンパク質間の相互作用速度を正確に測定するには、分析物として使用される実験サンプル中の特異的に結合するタンパク質の濃度知ることが不可欠です。

ビウレット溶液は何色ですか?

ビウレット試薬は、硫酸第二銅と水酸化ナトリウムで処理した酒石酸カリウムナトリウムの水溶液です。ペプチド結合(タンパク質)が存在すると、この青色の溶液はピンクパープルに色が変わります。

ビウレットテストの原理は何ですか?

ビウレットテストは、アルカリ性条件下でペプチド結合(-CONH-基)と紫色のキレート錯体を形成するCu(II)イオンの能力に基づいています。ペプチド結合の4つの窒素原子からの孤立した電子対は、銅(II)イオンを配位してキレート錯体を形成します。

タンパク質濃度をどのように計算しますか?

溶液中のタンパク質濃度は、分子量、吸光係数、およびλmaxをランベルトベールの法則の導出形式に代入することによって決定できます。物質のλmaxは、物質が最も強い吸光度を経験する波長です。 Proteinの場合、この波長は280nmです。