GFP遺伝子の長さはどれくらいですか？
質問者：Vasilis Gfreiter |最終更新日：2020年6月22日
カテゴリ：ビジネスおよび金融バイオテクノロジーおよび生物医学産業
GFPは、分子量27 kDaの238アミノ酸からなるタンパク質で、長さ4.2 nm、直径2.4nmの円柱状です。ヘキサペプチド発色団の化学構造が解明されています（6）。
また、GFPは遺伝子ですか？緑色蛍光タンパク質（ GFP ）は、238個のアミノ酸残基（26.9 kDa）で構成されるタンパク質であり、青色から紫外線の範囲の光にさらされると明るい緑色の蛍光を発します。細胞および分子生物学では、 GFP遺伝子が発現のレポーターとして頻繁に使用されます。
第二に、GFPは可溶性ですか？部位特異的変異誘発により、可溶性修飾GFP （smGFP）と呼ばれるコドン修飾GFPのより可溶性バージョンを生成しました。このタンパク質の励起および発光スペクトルは、野生型GFPとほぼ同じです。
同様に、GFP蛍光はどのくらい持続しますか？
緑色蛍光タンパク質（ GFP ）の半減期は、培養マウスLA-9細胞で生化学的に決定されました。野生型タンパク質は、半減期が約26時間で安定していることがわかりましたが、半減期が短いタンパク質に由来する推定タンパク質分解シグナル配列を追加すると不安定になる可能性があります。
GFPはどのように緑色光を発しますか？
緑色蛍光タンパク質（ GFP ）精製されたGFPの溶液は、通常の室内照明の下では黄色に見えますが、屋外で日光の下に置くと、明るい緑色で光ります。タンパク質は、日光からの紫外線を吸収し、次いでより低エネルギー緑色光として出射します。
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人間はプラスミドを持っていますか？
例えば、ヒトDNAのようなDNAの小片は、適切な要素に取り付けられた環状、かつそれらが伝播される細菌に導入することができる-換言すれば、コピー-宿主細菌染色体と一緒。クローン化されたDNAを含むこれらの小さな円はプラスミドと呼ばれます。
GFPは有毒ですか？
GFPが細胞に対して毒性があるかどうかについては相反する結果があります。まず、蛍光タンパク質の凝集は細胞毒性を引き起こす可能性があります。第二に、 GFPを長時間励起すると、細胞に毒性のあるフリーラジカルが生成される可能性があります。
bla遺伝子とは何ですか？
bla —抗生物質アンピシリンを分解する酵素ベータラクタマーゼをコードする遺伝子。増殖培地にアンピシリンを入れることにより、 bla遺伝子を含む細菌を選択することができます。
GFP遺伝子はどのように挿入されますか？
GFP遺伝子は、別の生物の遺伝子のプロモーターの下流に挿入することができます。 RNAポリメラーゼはプロモーター領域に結合して転写を開始します。 GFP遺伝子が正しく挿入されていれば、クラゲ以外の生物でも発現する可能性があります。
クラゲにGFPがあるのはなぜですか？
1960年代初頭にクラゲから分離されて以来、緑色蛍光タンパク質（ GFP ）は、細胞内の他のタンパク質を追跡するための生物学的ツールとして使用されてきました。 GFP遺伝子は、目的のタンパク質の遺伝子に付加され、細胞に挿入されます。
GFPをどのように精製しますか？
アルコール/塩ATPSによるGFPの精製
0.3mlの5MNaClおよび2.33mlの飽和硫酸アンモニウムを順番に1mlのTSPのアリコートに加えた。続いて、無水エタノールを直ちに溶液全体に1：3（体積対体積、v / v）の比率で添加し、30秒間激しく振とうしました。 GFPは自然界のどこにありますか？
GFPは未来的なSF素材のように聞こえるかもしれませんが、実際には1億6000万年以上前から存在しています。このタンパク質は、北米のクラゲAequorea victoriaで自然に発現し、環境中の青色光からエネルギーを吸収し、それに応じて緑色の輝きを放ちます。
GFPの用途は何ですか？
緑色蛍光タンパク質（GFP）は、タンパク質にタグを付けたり、生細胞の細胞プロセスの動的変化を研究したりするために広く使用されています。
GFPで細胞を固定できますか？
それらを修正する必要は本当にありません。生細胞を画像化するだけです。あなたはGFPシグナルに加えて、核染色をしたい場合は、細胞透過性であるDRAQ5を、使用することができますし、あなたにDAPIと同じ情報を提供します。 GFPを検出するために細胞を固定する唯一の理由は、細胞内抗原も染色する必要がある場合です。
GFPはどのように検出されますか？
GFPの発現は、使用する宿主細胞株に応じて、蛍光顕微鏡、蛍光活性化セルソーティング（FACS）分析、またはトランスフェクションの24〜72時間後の蛍光光度計アッセイによって検出できます。 GFPを発現する安定した哺乳動物細胞株に関する1つの公表された報告があります（48）。
GFPをどのように保存しますか？
開く前にGFPを-20°Cで保存します。内容物を分注し、-20°C以下で凍結して長期保存します。凍結と解凍のサイクルは避けてください。室温で放置した後、完全に透明でない場合は、製品を遠心分離します。
トランスフェクション後どれくらいGFPがありますか？
GFPの発現はトランスフェクションから4時間以内の細胞で顕著でした。 9回の別々のトランスフェクションでは、トランスフェクトされた細胞の約20％がGFPを発現し、トランスフェクション後の最初の5日間の平均蛍光はコントロール細胞の40〜50倍でした（15蛍光単位[FU]対0.3 FU）。
トランスフェクション効率をどのように評価しますか？
β-ガラクトシダーゼアッセイは、β-ガラクトシダーゼ活性に関連する比色変化を測定することにより、トランスフェクション効率を決定するために使用できます。哺乳類細胞におけるベータガラクトシダーゼ遺伝子融合。
なぜEGFPはGFPよりも優れているのですか？
哺乳類細胞での蛍光が35倍高く、検出が容易なため、野生型GFPの代わりにEGFPをターゲットとして使用しました。 GFPおよびS65Tの結晶構造は、 EGFPの変異がタンパク質のN末端およびC末端構造に影響を与える可能性が低いことを示唆しています（12、13）。
GFPは分子生物学でどのように使用されていますか？
GFP遺伝子はクローン化されており、分子生物学でマーカーとして使用されています。 Tsienは、 GFPの構造が観察された緑色蛍光をどのように生成するかを正確に発見し、構造を変更してわずかに異なる波長の光を放出する分子を生成し、異なる色のタグを与えることに成功しました。
GFP融合タンパク質とは何ですか？
はじめにGFP（緑色蛍光タンパク質）融合タンパク質は、特定の生物の組織だけでなく、個々の細胞の幅広い質問に対処するために使用されてきました。 GFP融合タンパク質は一過性または安定して発現させることができます。