カルセインはどのように機能しますか？
質問者：レニーマッケンジー|最終更新日：2020年1月28日
カテゴリ：科学生物科学
カルセインAMは、ほとんどの真核細胞の細胞生存率を測定するために使用できる細胞透過性色素です。生細胞では、細胞内エステラーゼによるアセトキシメチルエステルの加水分解後、非蛍光カルセインAMが緑色蛍光カルセインに変換されます。
ここで、どのようにカルセインを服用しますか？Calcein AMDyeのバイアルあたり50µlのDMSOを加え、よく混合して1mMストック溶液を取得します。すぐに使用するか、溶液を-20°Cで一度に使用するアリコートに保存します。 3. 1 xHankの平衡塩類溶液と20mM HEPES（HHBS）または選択したバッファーでカルセインAM色素（1-10µM）の作業用ストック溶液を準備します。
カルセインAMは有毒ですか？カルセイン、 AMは、細胞毒性が低いため、酵素活性、細胞膜の完全性、および長期的な細胞追跡の研究に使用されてきました。特定の細胞株および実験条件では、比較的高濃度のカルセイン、 AMが細胞に毒性を示す可能性があることに注意することが重要です。
これを考慮して、カルセインAMはどのくらい持続しますか？
1年
ライブデッドステインはどのように機能しますか？
LIVE / DEAD Fixable Dead Cell Stain Kitsは、蛍光反応性色素と細胞タンパク質（アミン）との反応に基づいています。これらの色素は生細胞膜に浸透できないため、細胞表面タンパク質のみが色素と反応し、薄暗い染色になります（図1、 LIVE ）。
13関連する質問の回答が見つかりました
細胞が緑色に蛍光を発するために、どの細胞酵素がカルセインと反応していますか？
生きた細胞では、非蛍光カルセインAMは細胞内エステラーゼによりアセトキシメチルエステルの加水分解後に緑-fluorescentカルセインに変換されます。この色素は、1 mgの固体（C-1430）としても入手可能で、DMSO（C-3099）に再懸濁されています。
死んだ細胞をどのように特定しますか？
死んだ細胞を特定する最も一般的な方法は、ヨウ化プロピジウムやSTYOXシリーズの色素などの細胞不透過性DNA結合色素を使用することです。健康な生細胞は無傷の細胞膜を持っており、色素に対するバリアとして機能するため、細胞に入ることができません。
細胞生存率とは何ですか？
細胞生存率は、集団内の生きた健康な細胞の割合の尺度です。細胞生存率は、膜の完全性の喪失などの細胞死のマーカーに関する読み取り値を提供する細胞毒性アッセイを使用して評価することもできます。
ライブデッドアッセイとは何ですか？
ライブデッドアッセイ染色液は、生細胞と死細胞を区別して標識する2つの蛍光色素の混合物です。生細胞色素は無傷の生細胞を緑色に標識します。遍在する細胞内エステラーゼがエステル基を除去し、分子を蛍光性にするまで、それは膜透過性で非蛍光性です。
細胞の生存率をどのようにテストしますか？
テトラゾリウム細胞生存率アッセイは、細胞のデヒドロゲナーゼに依存して、吸光度によって測定される着色されたホルマザン生成物を形成します。他のアッセイでは、ミトコンドリア呼吸鎖からの電子受容によるレサズリンの還元を使用して、蛍光レサズリンを形成します。
クリスタルバイオレットは生細胞または死細胞を染色しますか？
クリスタルバイオレットは、実際には、死んだ細胞だけでなく、生きている細胞（毒性はありますが）を染色します。生存率アッセイは、付着細胞でのみ使用されます。プレート上の生細胞と死細胞を区別しません。死細胞は付着しなくなったため、単に洗い流されます。
セルに追加すると、DAPIは何をしますか？
DAPI （4 '、6-ジアミジノ-2-フェニルインドール）は青色蛍光DNA染色であり、dsDNAのAT領域に結合すると約20倍の蛍光増強を示します。色素は細胞不透過性であるため、 DAPIは一般に固定細胞の染色に使用されますが、高濃度で使用すると染色は生細胞に入ります。
細胞生存率アッセイとは何ですか？
生存率アッセイは、臓器、細胞、または組織が生存率を維持または回復する能力を決定するために作成されるアッセイです。細胞株が付着して分裂する能力のアッセイは、膜の完全性よりも初期の損傷を示している可能性があります。
ヘキストは死んだ細胞を染色しますか？
DAPIおよびHoechst色素分子は、DNA二重らせんの副溝に付着します。これらの蛍光色素は、ヘキスト色素を除いて、生細胞の細胞膜を透過せず、死んだ細胞の蛍光インジケーターとして使用できます。